Técnicas de Separación de Proteínas
Electroforesis SDS-PAGE
La electroforesis SDS-PAGE es una técnica que separa moléculas en un campo eléctrico según su carga y tamaño. Se utiliza SDS (dodecilsulfato sódico) para desnaturalizar las proteínas y darles una carga negativa uniforme. Las proteínas más pequeñas se mueven más rápido a través del gel de poliacrilamida, lo que permite separarlas por tamaño.
Espectrometría de Masas
La espectrometría de masas determina la relación carga/masa de una molécula, lo que permite identificar y cuantificar proteínas en mezclas complejas. También se puede utilizar para determinar la secuencia de aminoácidos de un péptido.
Cromatografía de Intercambio Iónico
La cromatografía de intercambio iónico separa las proteínas según su carga. Las proteínas con carga opuesta a la de la columna cromatográfica se unen a ella, mientras que las proteínas con la misma carga fluyen a través de ella. Se puede utilizar una solución con una carga y concentración crecientes para eluir las proteínas unidas.
Cromatografía de Afinidad
La cromatografía de afinidad separa las proteínas según su afinidad por un ligando específico. Las proteínas que se unen al ligando se retienen en la columna, mientras que las que no se unen fluyen a través de ella. Esta técnica es altamente específica pero requiere un ligando adecuado para la proteína de interés.
Cromatografía Líquida de Adsorción y HPLC
La cromatografía líquida de adsorción separa las moléculas según su polaridad. En la fase inversa, las moléculas apolares se retienen más tiempo en la columna apolar, mientras que las moléculas polares fluyen más rápidamente. La HPLC (cromatografía líquida de alta presión) utiliza alta presión para mejorar la resolución y la velocidad de separación.
Separación por Centrifugación Diferencial
La centrifugación diferencial separa los componentes celulares según su tamaño y densidad. Los componentes más grandes y densos, como los núcleos, sedimentan primero a velocidades de centrifugación más bajas. Aumentar la velocidad de centrifugación permite la separación secuencial de orgánulos y otros componentes celulares.
Separación por Centrifugación en Gradiente
La centrifugación en gradiente es similar a la centrifugación diferencial, pero utiliza un gradiente de densidad para separar partículas de tamaño y peso similares. Las partículas se separan según su coeficiente de sedimentación, que refleja su velocidad de sedimentación en el gradiente.