Fundamento: Determinación del Grupo Rh en Tubo

Poner de manifiesto la presencia del Ag D en la superficie de los hematíes enfrentándolos a un suero anti-D.

Material

• Tubos de hemólisis para centrifuga
• Rotulador de vidrio
• Gradilla
• Pipetas Pasteur
• Centrifuga

Reactivos

• Suero anti-D
• Albúmina bovina al 30%
• Suero fisiológico al 0,9%

Muestra

• Hematíes problema suspendidos al 5%, previo lavado de los hematíes 3 veces en solución salina, a 2000 rpm

Técnica

• Rotular los tubos con las letras D y A.
• En el tubo D añadir 1 gota de suero anti-D y en el tubo A 1 gota de albúmina bovina.
• Ponemos a cada tubo una gota de los hematíes suspendidos al 5%, agitar suavemente.
• Centrifugamos 1 minuto a 1000 rpm o 30 seg a 3.500 rpm

Lectura de Resultados

Despegamos el botón hemático golpeando suavemente con el pulpejo del dedo el tubo.

Hay aglutinación positiva si se forman grumos de color rojo en un líquido claro.

Si los hematíes se resuspenden homogéneamente hay aglutinación negativa.

El tubo de albúmina es un control negativo, debe dar siempre ausencia de aglutinación, si no es así el resultado de la prueba no será válido.

Interpretación Clínica

• Tubo D hay aglutinación, tubo A no hay aglutinación. Paciente Rh+.
• Si no hay aglutinación incubar los tubos a 37°C 30 min. Centrifugar a 1000 rpm 1 min y observar si hay aglutinación.
• Si continúa siendo negativo, hacer coombs indirecta.
• Si continúa siendo negativo, se informa que el paciente es Rh-.

Fundamento: Determinación del Grupo Rh en Porta

Detección del antígeno D en la superficie de los hematíes problema, empleando como reactivo suero monoclonal humano con anticuerpos anti-D.

Material

• Portaobjetos
• Pipetas Pasteur
• Rotulador de vidrio
• Palillos agitadores
• Visualizador luminoso

Reactivos

• Suero anti-D
• Albúmina bovina 30%

Muestra

• Sangre total anticoagulada

Técnica

• Dividir el porta en 2 secciones con el rotulador y marcar con una S (suero) y A (albúmina)
• En la sección S ponemos 2 gotas de suero anti-D y en la sección A ponemos 2 gotas de albúmina bovina.
• Ponemos 1 gota de sangre a cada una de las secciones y mezclamos con los palillos.
• Ponemos el porta sobre el visualizador previamente calentado, y lo balanceamos para favorecer la mezcla.

Lectura de Resultados

• Esperamos 2 minutos antes de hacer una lectura de resultados.
• Aglutinación positiva: aparecen grumos rojos sobre un fondo claro, no confundir con coágulos de fibrina.
• Aglutinación negativa: la mezcla da lugar a una suspensión homogénea de los hematíes.
• La mezcla de sangre con albúmina bovina debe ser siempre aglutinación negativa
• Si no es así, no se informará del resultado de la prueba

Fundamento: Detección de AC Irregulares

Mediante test de coombs indirecto poner en evidencia la existencia o no de anticuerpos irregulares en el suero del paciente.

Material

• Tubos de hemólisis
• Gradilla
• Rotulador
• Centrifuga
• Micropipeta de 10-100 microlitros
• Pipeta graduada
• Baño termostadado

Reactivos

• Hematíes tipados al 0,8% en medio tamponado con conservantes
• Hematíes del paciente para auto control
• Suero fisiológico al 0,9%

Muestra

• Plasma

Técnica

• Suspender hematíes para auto control
• Rotular 11 tubos de hemólisis para panel de hematíes tipados y un tubo n° 12 para hematíes auto control
• Poner 50 microlitros (1 gota) en cada una de las suspensiones de hematíes en el tubo correspondiente.
• Añadir a cada tubo 100 microlitros de plasma o suero problema
• Incubar 1h a 37°C en baño termostatado
• Lavar 3 veces cada tubo con una solución salina, el último lavado retirar todo el sobrenadante y dejar el botón hemático.
• Añadir a cada tubo 50 microlitros de suero de coombs
• Centrifugar 1 min a 1000 rpm.

Lectura de Resultados

Con el pulpejo de los dedos despegar suavemente el botón hemático

Observar la presencia o no de aglutinación en cada tubo.

Nuestro resultado es negativo no se observa aglutinación en los tubos

No tiene anticuerpos irregulares. Debemos comprobar microscópicamente.

Fundamento: Determinación del Fenotipo y Genotipo del Sistema Rh

^{Enfrentar hematíes problema a distintos sueros dirigidos contra los antigenos del sistema Rh.}

^Material.

• ^{tubos de centrifuga}
• ^centrifuga
• ^rotulador
• ^{pipetas Pasteur}
• ^gradilla

^Reactivos.

• ^{Suero anti-D}
• ^{Suero anti-E}
• ^{Suero anti-C}
• ^{Suero anti-e}
• ^{Suero anti-c}
• ^{Suero fisiologico}

^Muestra.

• ^{Suspensión de hematíes lavados al 5% en solución salina}

^Técnica.

• ^{lavar los hematíes y suspenderlos al 5%}
• ^{rotular 5 tubos de centrifuga cada uno con las letras D, C, E, c, e}
• ^{en cada tubo poner una gota del antisuero correspondiente y 1 gota de la suspensión de hematíes al 5%, homogeneizar suavemente.}
• ^{Centrifugar los tubos 1 min a 1000 rpm.}

^{Lectura de resultados.}

• ^{Golpear con el pulpejo del dedo el fondo del tubo para despegar el sedimento.}
• ^{El resultado + es la presencia de aglutinación}
• ^{Resultado – ausencia de aglutinación}
• ^{D+, E+, c+,e+ genotipos posibles: DcE/dce, DcE/Dce, Dce/dcE}

^{Fundamento.Determinacions del tiempo de lisis del coagulo de euglobulinas}

^{Este método consiste en precipitar la fracción euglobulínica del plasma con}

^{Ácido, para luego redisolverla con un buffer adecuado y finalmente formar}

^{Un coágulo. La desaparición de éste, representa la lisis de euglobulinas y se}

^{Debe a la presencia, en esta formación del plasma, tanto de plasminógeno}

^{Como de activador de mismo.}

^Material.

• ^{Micro pipeta de 100µl y una de 200-1000 µl}
• ^{Gradilla micro pipetas}
• ^{Pipeta Pasteur de plástico}
• ^{Tubos de centrifuga}
• ^Batea
• ^Pinzas
• ^Isótopo
• ^{Gradilla tubos}
• ^Centrifuga
• ^prepipeta
• ^{puntas micro pipetas}
• ^{vaso precipitados}
• ^{pipeta 5ml}
• ^parafilm

^Muestra.

• ^P.P.P

^Reactivos.

• ^{H2O destilada 4ºc}
• ^{Trombina bovina}
• ^{Plasma control normal}

^Técnica.

• ^{Rotulamos  un tubo muestra (M).}
• ^{Ponemos 100µl ac. Acético; 300 µl de muestra; 4,6ml de H2O. homogeneizamos.}
• ^{Tapamos el tubo M con parafilm}
• ^{Enfriamos los tubos 15 min en nevera}
• ^{La trombina bobina esta aun muy concentrada 40u/ml asi que la diluimos}

^{C1.V1= C2.V2}

^{40U/ml.VI= 10U/ml.2500 µl}

^{10U/ml. 2500 µl}

  ^{= 625 µl}

     ^40U/ml

• ^{625 µl de trombina bovina + 1875 µl de agua destilada}
• ^{Centrifugamos 5 min a 3000 rpm}
• ^{Retiramos sobrenadante  sin tocar el botón}
• ^{Limpiamos con cuidado la pared interna del tubo con un isótopo}
• ^{Redisolvemos las euglobulinas añadiendo 0,3 ml de solución tampón}
• ^{Agitamos los tubos hasta la redisolución total del sedimento de euglobulinas}  
• ^{Desencadenamos la formación del coagulo de euglobulinas mediante la adición a cada tubo de 0,3ml de trombina}
• ^{Homogeneizamos suavemente}
• ^{Introducimos los tubos en la estufa a 37ºc}
• ^{Verificamos la formación del coagulo a partir de 20 segundos contados desde la adición de la trombina}
• ^{Dejamos los tubos con el coagulo dentro de la estufa.}
• ^{Observar la aparición de la lisis del coagulo, inclinando lentamente los tubos  a intervalos de 10 min y anotar el tiempo transcurrido hasta ese momento.}

^{Lectura de Resultados}

• ^{Se toma como tiempo de lisis el tiempo transcurrido desde la formación del Coágulo hasta su completa lisis.}
• ^{Valores normales: entre 2 horas y 3 horas (Instituto de Angiología); más de 120 minutos (IHI)}

• ^{No se ha observado lisis del coagulo tras 1h.}

^{Interpretación semiológica}

^{• El test de lisis se acorta por el déficit de fibrinógeno, la presencia de}

^{plasmina o activadores de plasminógeno.}

^{• Se aumenta cuando hay presencia de: procesos inflamatorios crónicos,}

^{Embarazos, nefropatías, procesos tromboembólicos}.