Visualización del Rendimiento de Orina al Microscopio Óptico
Objetivo
- Manejo correcto de la centrífuga.
- Elaboración correcta de un sedimento urinario.
- Enfocar una preparación en fresco de orina al microscopio óptico.
Fundamento
Conectamos la centrífuga a la corriente eléctrica, abrimos la tapa y situamos en la cámara los tubos de centrífuga que ya contienen las muestras. Los tubos deben ser de igual tamaño y, cuando contienen la muestra, deben pesar lo mismo. Si no se ocupan todos los portamuestras, se deben colocar los tubos enfrentados con el fin de mantener el equilibrio. Cerramos la tapa con cuidado, seleccionamos la velocidad de centrifugación, accionamos el control de tiempo y, finalmente, volvemos el mando del selector de velocidad a la posición 0 una vez terminada la centrifugación.
En la orina se encuentran estructuras que son más densas que el agua que forma parte de ella. Entre otras estructuras normales que encontramos en la orina, encontramos las células de descamación, cristales y leucocitos. Al ser más densas, las vamos a concentrar para poder visualizarlas al microscopio, y esto se consigue mediante la centrifugación.
Mediante la centrifugación, precipitamos las estructuras que se encuentran en la orina y las visualizamos al microscopio.
Técnica
Material
- Orina
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Pipeta Pasteur
- Tubo de ensayo
- Parafilm
- Centrífuga
- Microscopio
Reactivo
Orina
Procedimiento
- Primero, homogeneizamos la orina.
- Después, llenamos un tubo de ensayo con la pipeta Pasteur hasta la última señal (10 ml).
- Seguidamente, tapamos el tubo de ensayo con Parafilm y rotulamos.
- A continuación, lo introducimos en la centrífuga y centrifugamos 15 minutos a 1500 rpm, teniendo la precaución de que la centrífuga esté siempre equilibrada.
- Decantamos la orina y resuspendemos el sedimento con la pipeta Pasteur.
- Cogemos una gota no muy grande del sedimento, la ponemos en un porta y cubrimos con un cubreobjetos.
- Seguidamente, colocamos el porta en el microscopio.
- Enfocamos al microscopio con el diafragma cerrado prácticamente y con poca luz.
- Enfocamos primero con el objetivo de x4 y después giramos el revólver y pasamos a enfocar con el objetivo de x40.
Valoración de la Densidad de la Orina con el Refractómetro
Objetivo
- Utilizar correctamente el refractómetro.
- Valorar la densidad de una orina con el refractómetro.
Fundamento
La medición se basa en el principio de la refracción de la luz a través de un líquido: cuando la luz pasa a través de un líquido, el ángulo refractado se muestra en una escala con lo que se puede determinar el total de sólidos disueltos en el líquido.
Los refractómetros están provistos de un enfoque ajustable del ocular, número de fácil lectura que aportan una buena resolución y un ajuste a 0 mediante un destornillador para calibración que permite que coloquemos la franja (que divide la escala en dos mitades) en el punto cero llamado línea Wt.
Los refractómetros tienen 3 escalas:
- Densidad de la orina (g/dl).
- Escala que mide el índice de refracción de la sustancia en cuestión.
- Es adimensional.
Valoración de pH de Distintas Mezclas
Objetivo
- Utilizar correctamente el pH-metro.
- Valorar el pH de distintas mezclas.
Fundamento
El pH-metro es un instrumento que determina la acidez, neutralidad o basicidad de las sustancias. El pH-metro mide el pH de la disolución basándose en la potenciometría, que mide la diferencia del potencial de la corriente eléctrica. Esta diferencia se produce entre el electrodo indicador del aparato y la solución, y depende de la concentración de protones que haya en dicha disolución. Por ello, se debe cuidar y manejar con exquisito cuidado.
Existen dos tipos de pH-metro: de mesa y portátil.
Técnica
Reactivo
- Mezclas de diferentes sustancias.
- Soluciones tampón a pH 7 y pH 4.01.
- Agua de grifo.
- Agua destilada.
Material
- pH-metro.
Procedimiento
Fase inicial
Quitar el tapón protector del electrodo de pH de manera que el bulbo de vidrio (que nunca se debe tocar con los dedos) quede al descubierto. Si está seco, se deberá sumergir la punta del electrodo unos 3 cm en solución tampón pH 7.01 durante unas horas.
Calibración
Después de sumergir el extremo del electrodo en solución tampón pH 7.01, retirar el líquido y esperar a que la lectura en pantalla se estabilice de forma automática. A continuación, se enjuaga el electrodo en agua destilada y se introduce en la solución pH 4.01 o en la solución pH 10.01. Posteriormente, remover el líquido y esperar a que la lectura en la pantalla digital se estabilice automáticamente (en el pH-metro portátil se realiza de forma manual; con un destornillador, se debe girar el potenciómetro situado a la derecha del interruptor de encendido hasta visualizar en la pantalla el valor deseado). Finalmente, se procede a enjuagar el electrodo en agua. Para una mayor precisión, se recomienda realizar recalibraciones periódicamente con las soluciones tampón de pH 7.01 y 4.01.
Introducimos el bulbo del pH-metro en el interior de la mezcla a valorar. Al finalizar la lectura de pH en las distintas mezclas, enjuagamos el electrodo con agua destilada y guardamos el electrodo con su tapón lleno de pH 7.
Preparar 250 ml de Solución Salina Fisiológica NaCl 0.9%
Objetivo
- Aprender a hacer una disolución.
- Aprender a hacer una pesada y manejar correctamente una balanza.
Fundamento
Aprender a manejar la balanza y a pesar con exactitud un sólido. Aprender a hacer una mezcla homogénea de dos sustancias, una sólida y otra líquida. 0.9 g de cloruro sódico por 100 ml de disolución.
Cálculos:
Disolución:
100 ml – 0.9%
250 ml – x
x = 0.9 g NaCl x 250 ml / 100 = 2.25 g NaCl
Técnica
Materiales
- Papel filtro.
- Vaso de precipitados.
- Balanza.
- Cucharilla-espátula.
- Embudo cónico.
- Vidrio de reloj.
- Matraz aforado de 250 ml.
- Varilla de vidrio.
- Frasco lavador.
- Pipeta Pasteur.
- Parafilm.
Reactivo
- Cloruro sódico.
- Agua destilada.
Procedimiento
- Encendemos la balanza, colocamos el vidrio de reloj y taramos.
- Pesamos 2.25 g de cloruro sódico.
- Echamos el cloruro sódico en el vaso de precipitados con ayuda de la espátula.
- Seguidamente, con el frasco lavador, echamos un poco de agua destilada en el vidrio de reloj para limpiar los restos de soluto. Repetimos dos veces.
- A continuación, con ayuda de la varilla, homogeneizamos.
- Colocamos un embudo en el matraz y echamos la disolución del vaso de precipitados.
- Echamos un poco más de disolvente en el vaso de precipitados para arrastrar el soluto que haya quedado y pasamos al matraz aforado.
- Con ayuda de una pipeta Pasteur, enrasamos en el matraz aforado hasta la línea de enrase.
- Tapamos el matraz con Parafilm y rotulamos poniendo el nombre de la disolución y la fecha.
- Finalmente, homogeneizamos.