Técnicas Cromatográficas

Cromatografía Líquida

Cromatografía Líquida de Reparto

• Puede ser líquido-líquido (inconveniente: pérdida de fase estacionaria).
• La fase estacionaria se retiene sobre la superficie del soporte por adsorción.

Cromatografía de Reparto de Fase Unida Químicamente

• La fase estacionaria se une químicamente a la superficie del soporte.
• Los recubrimientos más utilizados son los siloxanos.
• Se suele usar un proceso de bloqueo para evitar reacciones secundarias.

Cromatografía en Fase Normal

• Se usan fases estacionarias de elevada polaridad.

Cromatografía en Fase Inversa

• Se usan fases estacionarias no polares.

Cromatografía de Adsorción (Líquido-Sólido)

• En la fase estacionaria se usa sílice o alúmina.
• La única variable que puede optimizar el factor de retención y la selectividad de la columna es la composición de la fase móvil.

Cromatografía Iónica

• Sirve para la separación y determinación de iones.
• Se basa en equilibrios entre los iones de la disolución y los iones del mismo signo que están en la superficie de un sólido de elevada masa molecular e insoluble.

Cromatografía de Gases

Cromatografía de Gas-Sólido

• La fase móvil es un gas y la estacionaria un líquido retenido sobre un material sólido.

Cromatografía de Gas-Sólido

• La fase móvil es un gas y la estacionaria un sólido.

Gas Portador

• Debe ser químicamente inerte y seco (N₂, H₂/He o H₂).
• Se utiliza un filtro de carbón para eliminar el oxígeno.
• El caudal se consigue mediante válvulas.

Factores que Afectan a la Eficiencia de una Columna

• Longitud: Mientras más larga, mayor eficiencia.
• Diámetro: Cuanto más pequeño, mayor número de platos teóricos.
• Tamaño de las partículas: Mientras más pequeñas, mejor.
• Naturaleza de las fases: Influye en la interacción entre el analito y la columna.
• Grosor de la fase estacionaria: A mayor grosor, mayor equilibrio y picos más anchos.
• Temperatura de la columna: A mayor temperatura, menor eficacia.
• Velocidad del gas portador: A mayor flujo, menor eficacia.
• Cantidad de muestra inyectada: A menor carga, mejor.

Parámetros de Calidad

Exactitud

Grado de concordancia entre el resultado de una medida y el valor considerado como verdadero.

Precisión

Grado de concordancia entre un grupo de resultados obtenidos al aplicar el mismo método a una misma muestra.

Repetibilidad

Dispersión de resultados de ensayos mutuamente independientes, utilizando el mismo método en el mismo laboratorio.

Reproducibilidad

Dispersión de resultados de ensayos mutuamente independientes, utilizando el mismo método en diferentes laboratorios.

Sensibilidad

Capacidad para discriminar entre concentraciones semejantes de analito.

LOD (Límite de Detección)

Concentración mínima de analito que se puede detectar pero no cuantificar.

LOQ (Límite de Cuantificación)

Concentración mínima de analito que se puede cuantificar.

Selectividad

Capacidad para originar resultados que dependan exclusivamente del analito/os para su identificación o cuantificación.

Tipos de Columnas

• Columnas de Sílice: Se disuelven a pH alto.
• Columnas de Partículas Superficialmente Porosas: Mayor eficiencia, resolución y sensibilidad.
• Columnas Monolíticas: Separaciones más rápidas, análisis de muestras sucias y viscosas.

Parámetros Físico-Químicos de las Columnas

• Tamaño del poro: Influye en la retención de los analitos.
• Carga de carbono: Cantidad de fase estacionaria enlazada a la sílice. Influye en la hidrofobicidad y la retención.
• Área superficial: Material disponible para interaccionar con los analitos. Influye en la retención.